GFP為什么在紫外線(xiàn)下會(huì)發(fā)光？

GFP又名 wtGFP， avGFP， gfp10， 綠色熒光蛋白

GFP綠色熒光蛋白是一種基本的（構(gòu)成熒光的）長(zhǎng)斯托克斯位移熒光蛋白，發(fā)表于1992年，來(lái)源于Aequorea victoria。它對(duì)酸的敏感性低。GFP激發(fā)光的波長(zhǎng)是395nm，mEGFP發(fā)射光的波長(zhǎng)是509nm。

從上圖的GFP的激發(fā)光譜圖可以看出，紫外線(xiàn)是能夠激發(fā)GFP發(fā)出綠色的熒光。

下圖為用LUYOR-3410高強(qiáng)度紫外線(xiàn)燈觀察GFP的熒光表達(dá)效果：

紫外線(xiàn)燈照射下觀察煙草葉片上的GFP綠色熒光

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2. 高強(qiáng)度紫外線(xiàn)燈用于觀察GFP的表達(dá) 

為什么大家都選擇高強(qiáng)度紫外燈LUYOR-3410觀察GFP？

高強(qiáng)度紫外燈LUYOR-3410采用的是大功率紫外線(xiàn)led模組，25cm輸出紫外線(xiàn)強(qiáng)度能夠達(dá)到10mW/cm2，能夠激發(fā)GFP發(fā)出明亮熒光，LUYOR-3410照射面積大，適用觀察葉片、植株、小鼠等，LUYOR-3410紫外燈輕巧便攜，無(wú)需預(yù)熱，即開(kāi)即用，目前，在中國(guó)農(nóng)科院、華中農(nóng)大、南京農(nóng)大、南京林業(yè)大學(xué)、西南大學(xué)等科研院所得到了廣泛應(yīng)用。

純化的GFP溶液在典型的室內(nèi)燈光下看起來(lái)是黃色的，但是當(dāng)在戶(hù)外陽(yáng)光下照射時(shí)，它們會(huì)發(fā)出明亮的綠色。蛋白質(zhì)吸收來(lái)自陽(yáng)光的紫外線(xiàn)，然后將其作為低能量的綠光發(fā)射。以下是人們?cè)诟鞣N搜索引擎中提出的一些相關(guān)問(wèn)題。

為什么GFP會(huì)發(fā)出熒光？

野生型GFP（wtGFP）維多利亞，當(dāng)aequorin與Ca2 +離子相互作用時(shí)發(fā)生GFP熒光，誘導(dǎo)藍(lán)色光芒。其中一些發(fā)光能量被轉(zhuǎn)移到GFP，將整體顏色向綠色移動(dòng)。

熒光蛋白如何發(fā)光？

該蛋白質(zhì)含有238個(gè)氨基酸，其中三個(gè)（數(shù)字65至67）形成一個(gè)發(fā)出可見(jiàn)綠色熒光燈的結(jié)構(gòu)。...在水母中，GFP與另一種稱(chēng)為aequorin的蛋白質(zhì)相互作用，當(dāng)與鈣一起添加時(shí)會(huì)發(fā)出藍(lán)光。

GFP 對(duì)光敏感嗎？

GFP對(duì)酸敏感質(zhì)子化狀態(tài)，然而，在488nm處不吸收光。

GFP吸收什么波長(zhǎng)？

GFP在395nm處吸收藍(lán)光，在475nm處具有較小的峰值，并在508nm處發(fā)射綠光，量子產(chǎn)率為0.72-0.85（12，13）。

為什么來(lái)自水母的發(fā)光基因在轉(zhuǎn)基因小鼠中起作用？

這些老鼠之所以發(fā)光，是因?yàn)榭茖W(xué)家將某些生物發(fā)光水母中發(fā)現(xiàn)的基因插入到它們的DNA中。該基因是一種蛋白質(zhì)的配方，當(dāng)被藍(lán)色或紫外線(xiàn)擊中時(shí)會(huì)發(fā)出綠色。...結(jié)果，他們的皮膚，眼睛和器官發(fā)出詭異的光芒。

熒光標(biāo)記物如何工作？

熒光標(biāo)記物具有在其生物環(huán)境中研究蛋白質(zhì)的能力。當(dāng)一定波長(zhǎng)的光被引導(dǎo)到分子的發(fā)色團(tuán)時(shí)，光子被吸收并將電子激發(fā)到更高的能量狀態(tài)。...多種熒光標(biāo)記可用于染色細(xì)胞的不同部分。

為什么熒光蛋白很重要？

光激活熒光蛋白能夠在空間和時(shí)間上跟蹤光標(biāo)記的分子和細(xì)胞，也可用于超分辨率成像。基因編碼的傳感器可以監(jiān)測(cè)酶的活性和各種分析物的濃度。

熒光是如何工作的？

熒光，發(fā)射電磁輻射，通常是可見(jiàn)光，由材料中原子的激發(fā)引起，然后幾乎立即重新發(fā)射（在大約10-8秒內(nèi)）。初始激發(fā)通常是由入射輻射或粒子（如X射線(xiàn)或電子）的能量吸收引起的。

為什么GFP如此穩(wěn)定？

GFP是238個(gè)氨基酸的單鏈多肽（12）。這些氨基酸中的大多數(shù)形成?片，通過(guò)反平行結(jié)構(gòu)壓實(shí)形成桶。...緊湊的結(jié)構(gòu)使GFP在各種條件下都非常穩(wěn)定，包括用蛋白酶處理（1）。

什么是 GFP 表達(dá)？

綠色熒光蛋白（GFP）已被用作基因表達(dá)的報(bào)告分子，因?yàn)樗谒{(lán)光激發(fā)后發(fā)出綠色熒光。...48小時(shí)后，從上清液中收獲載體顆粒并施加到靶細(xì)胞上，然后對(duì)其進(jìn)行基因表達(dá)分析。

GFP 標(biāo)記是如何完成的？

GFP標(biāo)記是一種通過(guò)使用GFP作為熒光蛋白報(bào)告器來(lái)制備用于熒光顯微鏡的樣品的方法。這是通過(guò)將GFP與靶蛋白在氨基酸鏈的N或C末端克隆來(lái)完成的。

GFP是否被紫外光激發(fā)？

野生型GFP有兩個(gè)激發(fā)峰：一個(gè)主要在395nm處，一個(gè)次要在475nm處。如果 GFP 在 395nm （紫外光）處被激發(fā)，它將在為508nm 處發(fā)射綠光。475nm處的激勵(lì)值為503nm。S65T突變導(dǎo)致發(fā)色團(tuán)電離。

GFP在固定后會(huì)發(fā)出熒光嗎？

作者能夠檢測(cè)熒光，然后使用10nm金標(biāo)記的二抗通過(guò)電子顯微鏡觀察切片。在這種情況下，GFP熒光在4%多聚甲醛和0.1%戊二醛中存活下來(lái)，并且可以通過(guò)熒光顯微鏡直接可視化。

綠色熒光蛋白吸收了什么波長(zhǎng)的光，發(fā)射了什么波長(zhǎng)的光？

來(lái)自維多利亞水母的綠色熒光蛋白（GFP）在用長(zhǎng)波長(zhǎng)紫外線(xiàn)（UV）或藍(lán)光（zui大400nm，475nm處有次級(jí)峰）激發(fā)時(shí)發(fā)出綠光（λmax = 509 nm）[1]。

RFP 在紫外線(xiàn)下會(huì)發(fā)光嗎？

綠色熒光蛋白。...純化的GFP溶液在典型的室內(nèi)燈光下看起來(lái)是黃色的，但是當(dāng)在戶(hù)外陽(yáng)光下服用時(shí)，它們會(huì)發(fā)出明亮的綠色。蛋白質(zhì)吸收來(lái)自陽(yáng)光的紫外線(xiàn)，然后將其作為低能量的綠光發(fā)射。

為什么熒光對(duì)水母很重要？

該蛋白質(zhì)在北美水母Aequorea victoria中自然表達(dá)，并通過(guò)吸收環(huán)境中藍(lán)光的能量并相應(yīng)地發(fā)出綠色光芒來(lái)起作用。科學(xué)家們不知道為什么這些水母進(jìn)化出它們的光芒，但有一種假設(shè)是，它可以幫助它們抵御捕食者。

GFP基因會(huì)發(fā)光嗎？

綠色熒光蛋白（GFP）是由維多利亞水母產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)，在可見(jiàn)光譜的綠色區(qū)域發(fā)出生物發(fā)光。...秀麗隱桿線(xiàn)蟲(chóng)，并開(kāi)創(chuàng)了一個(gè)GFP將被用作細(xì)胞生物學(xué)發(fā)光標(biāo)志物的時(shí)代。

為什么維多利亞Aequorea會(huì)發(fā)光？

維多利亞水母的生物發(fā)光是由于綠色熒光蛋白（GFP）和稱(chēng)為aequorin的化學(xué)發(fā)光蛋白的存在。...這種蛋白質(zhì)在與鈣結(jié)合時(shí)會(huì)發(fā)光，而不需要照明來(lái)激發(fā)。

轉(zhuǎn)基因水果的主要用途是什么？

傳統(tǒng)的作物改良方法往往收效有限，因?yàn)楸扼w水平不同，遺傳變異性有限，生育率低。因此，遺傳轉(zhuǎn)化為商業(yè)品種的改良提供了巨大的潛力。

水晶水母如何發(fā)光？

有時(shí)，水晶果凍會(huì)在鈴鐺的邊緣周?chē)l(fā)出綠色的光芒。這是由一種稱(chēng)為aequorin的光蛋白引起的，它發(fā)出藍(lán)光（稱(chēng)為生物發(fā)光），以及一種稱(chēng)為綠色熒光蛋白（GFP）的輔助蛋白，它發(fā)出綠光。

熒光標(biāo)記物在黑暗中會(huì)發(fā)光嗎？

熒光標(biāo)記，例如我們的熒光醇基涂料標(biāo)記和熒光水性涂料標(biāo)記，因?yàn)樗鼈兡軌蚍瓷渥贤饩€(xiàn)或紫外線(xiàn)，因此在黑暗中會(huì)發(fā)光。專(zhuān)門(mén)發(fā)射紫外線(xiàn)的燈（也稱(chēng)為黑光）不發(fā)出人眼可見(jiàn)的光。

為什么熒光燈會(huì)發(fā)光？

您看到的額外光芒稱(chēng)為紫外線(xiàn)（UV）光。熒光顏色是紫外線(xiàn)反應(yīng)性的，并將光轉(zhuǎn)換為主波長(zhǎng)或顏色。...磷光顏料將光源儲(chǔ)存為能量，并在燈關(guān)閉后繼續(xù)發(fā)出光芒。

什么是熒光標(biāo)志物？

熒光標(biāo)記物是特定的分子，如蛋白質(zhì)，它們是共價(jià)結(jié)合的熒光團(tuán)，選擇性地結(jié)合到靶標(biāo)的功能團(tuán)上進(jìn)行檢測(cè)。zui常用的熒光分子是抗體。

蛋白質(zhì)熒光是如何工作的？

當(dāng)樣品吸收特定波長(zhǎng)的光并發(fā)射不同波長(zhǎng)的光時(shí)，就會(huì)發(fā)生熒光。在大多數(shù)情況下，例如蛋白質(zhì)，發(fā)射的光波長(zhǎng)比吸收的光長(zhǎng)。

黃色熒光蛋白有什么作用？

它們降低了氯化物的敏感性，更快的成熟和更高的亮度（定義為消光系數(shù)和量子產(chǎn)率的乘積）。通常，YFP作為遺傳編碼的FRET傳感器的受體，其中zui有可能的供體FP是單體青色熒光蛋白（mCFP）。

什么是紫外熒光？

熒光是一些寶石暴露在看不見(jiàn)的紫外線(xiàn) （UV） 下時(shí)發(fā)出的可見(jiàn)光。在天然鉆石中，藍(lán)色是zui常見(jiàn)的熒光顏色，但其他顏色可能可見(jiàn)。

紫外線(xiàn)下有什么熒光？

熒光礦物和寶石 在黑光下發(fā)光 熒光巖石包括螢石、方解石、石膏、紅寶石、滑石、蛋白石、瑪瑙、石英和琥珀。礦物和寶石由于雜質(zhì)的存在而zui常被制成熒光或磷光。

GFP在什么溫度下變性？

當(dāng)GFP在高于70°C，5，6 pH極端溫度或氯化胍的溫度下變性時(shí)會(huì)失去熒光。它只有在變性時(shí)才會(huì)部分恢復(fù)其熒光。評(píng)價(jià)了分離和提取的重組GFP的熱穩(wěn)定性。

BFP與GFP有何不同？

與pH 8.5和7.5下對(duì)SDS誘導(dǎo)的變性非常耐受的GFP不同，BFP在pH 8.5時(shí)容易失去約20%的熒光，在pH 7.5時(shí)容易失去約60%的熒光。

GFP的穩(wěn)定性如何？

接觸10分鐘后，GFP在磷酸鹽緩沖溶液（pH 7）中表現(xiàn)出zui大的穩(wěn)定性，有效氯的范圍為20-100 ppm，相當(dāng)于氯化WFI溶液中的40-70 ppm范圍（pH 11（0.23），磷酸鹽緩沖液中的10-50 ppm范圍（pH 6.86（0.21）。

GFP記者如何運(yùn)作？

綠色熒光蛋白（GFP）使表達(dá)它的細(xì)胞在紫外線(xiàn)下發(fā)出綠色。需要專(zhuān)門(mén)的顯微鏡來(lái)觀察單個(gè)細(xì)胞。黃色和紅色版本也可用，允許同時(shí)研究多個(gè)基因。它通常用于測(cè)量基因表達(dá)。

如何檢測(cè) GFP 表達(dá)？

GFP表達(dá)可以通過(guò)熒光顯微鏡、熒光活化細(xì)胞分選（FACS）分析或轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)熒光計(jì)測(cè)定來(lái)檢測(cè)，具體取決于所使用的宿主細(xì)胞系。有一份已發(fā)表的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系表達(dá)GFP的穩(wěn)定報(bào)告（48）。

為什么GFP在基因工程工作中很重要？

編碼綠色熒光蛋白（GFP）的基因zui近已成為真核生物中基因表達(dá)的重要視覺(jué)標(biāo)記，因?yàn)樗绕渌麍?bào)告基因更敏感，不需要特殊的輔助因子進(jìn)行檢測(cè)（7），并且可以用光譜熒光計(jì)進(jìn)行定量（24）。

什么是GFP質(zhì)粒？

pGLO質(zhì)粒是一種工程質(zhì)粒，用于生物技術(shù)，作為制造轉(zhuǎn)基因生物的載體。質(zhì)粒包含幾個(gè)報(bào)告基因，zui著名的是綠色熒光蛋白（GFP）和氨芐西林抗性基因。GFP是從水母魚(yú)Aequorea victoria中分離出來(lái)的。

如何測(cè)量GFP熒光？

流式細(xì)胞術(shù)和熒光顯微鏡是檢測(cè)GFP信號(hào)的兩種常規(guī)工具;流式細(xì)胞術(shù)是一種有效且靈敏的技術(shù)，用于定量分析熒光強(qiáng)度，而熒光顯微鏡可以可視化GFP的亞細(xì)胞位置和表達(dá)。

GFP和EGFP有什么區(qū)別？

GFP和EGFP之間的主要區(qū)別在于，GFP是一種摻入非哺乳動(dòng)物細(xì)胞分子克隆中的野生型蛋白質(zhì)，而EGFP是一種改進(jìn)或工程化的GFP類(lèi)型，可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

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